基因檢測的概念及應用範圍

      聚合酶鏈反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一種基本且廣泛應用的DNA突變檢測技術。PCR能夠在幾小時內選擇性地擴增單個DNA或RNA分子，將其增加至數百萬倍以上，從而直接檢測和分析患者特定基因的序列，無需進行DNA印跡或RNA印跡分析。此外，PCR分析時僅需極少細胞，無需從組織中提取大量的DNA或RNA樣本。PCR的原理是在耐熱DNA聚合酶（Taq）的作用下，使用一對與目標DNA雙鏈序列互補的人工合成寡聚核苷酸引物，擴增目的DNA片段（如下圖所示）。通過循環進行反複的熱變性、引物複性和延伸，靶序列的拷貝數會按指數倍增長（最高可達10^6-10^7倍）。

PCR的操作流程如下：

1. 使用加樣器向Eppendorf反應管中加入以下成分：PCR緩衝液、dNTPs、DNA聚合酶、引物混合液、基因組DNA模板和ddH2O。

2. 在預設的PCR儀上進行反應：首先在95℃條件下變性3分鍾（第一輪循環），接著進行以下循環30次：95℃變性30秒、56℃複性30秒、72℃延伸30秒，最後一輪循環結束後，在72℃條件下延伸10分鍾。需要注意的是，複性的溫度和時間根據靶DNA序列的長度和引物序列的不同而變化。

3. 反應結束後，取少量反應液進行瓊脂糖凝膠電泳，以確認是否產生了目標PCR產物。同時，通過對DNA染色後，可以將PCR產物條帶的濃度與分子量標誌（marker）條帶的濃度進行比較，從而估算大緻的DNA量。